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多克隆抗體制備的常見(jiàn)問(wèn)題解析

更新時(shí)間:2022-01-13點(diǎn)擊次數(shù):1198
  多克隆抗體制備能識(shí)別出與免疫原蛋白具有高同源性的蛋白,或者從非免疫原物種的組織樣品中篩選靶蛋白,例如當(dāng)未測(cè)試物種中的抗原性質(zhì)未知時(shí),有時(shí)會(huì)使用多克隆抗體。可識(shí)別多個(gè)結(jié)構(gòu)域,即使原始抗原的一些空間結(jié)構(gòu)或者序列發(fā)生小變化或者部分抗原決定簇變化,仍可以識(shí)別抗原,因此有更大的適應(yīng)性。
  多克隆抗體制備的常見(jiàn)問(wèn)題解析:
  1、免疫動(dòng)物該如何選擇?
  選擇宿主動(dòng)物時(shí),一般要考慮兩個(gè)問(wèn)題:
  (1)免疫效果能否保證。特別是對(duì)于蛋白抗原的情況,為了保證免疫成功,就要求宿主動(dòng)物與抗原來(lái)源物種之間有較遠(yuǎn)的親緣關(guān)系,如果不太能確定親緣關(guān)系的遠(yuǎn)近,建議把抗原的序列與被免疫的動(dòng)物相應(yīng)的蛋白的序列進(jìn)行一個(gè)對(duì)比,優(yōu)先選擇同源性較低的物種進(jìn)行免疫。
  (2)抗血清產(chǎn)量的問(wèn)題。根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康牟煌寡宓挠昧恳灿兴煌?/div>
  如果后續(xù)是做Western Blot,那么只需要一點(diǎn)點(diǎn)血清就夠了,這個(gè)時(shí)候就可以選用小鼠這樣的小動(dòng)物作為免疫動(dòng)物,而如果想生產(chǎn)二抗作為商業(yè)使用,則可選用羊、驢、馬這樣的大型動(dòng)物,大型動(dòng)物還可以進(jìn)行多次放血,以提高動(dòng)物的利用率
  2、如何選擇抗原?
  (1)降解的蛋白抗原利于制備用于篩選細(xì)菌表達(dá)cDNA文庫(kù)或免疫沉淀。
  (2)用于篩選真核細(xì)胞轉(zhuǎn)染系統(tǒng)表達(dá)的cDNA文庫(kù)或免疫沉淀,建議選用自然的蛋白抗原。
  (3)如果制備抗*型抗體,所用抗原可以是可溶性Ig分子,或者是完整的細(xì)胞,也可以是基因工程表達(dá)產(chǎn)品*型決定簇、人工合成多肽及抗原化抗體等。
  目前,以各類病原生物活體感染動(dòng)物而獲得多克隆抗體(抗血清)作為檢測(cè)抗體,仍是常用方法。
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