国产精品女视频一区二区丨午夜视频在线观看免费观看1丨无码熟妇人妻av在线影片免费丨欧美与黑人午夜性猛交久久久丨国产成人精品免高潮在线观看

010-56256916

技術文章

TECHNICAL ARTICLES

當前位置:首頁技術文章蛋白表達是什么?

蛋白表達是什么?

更新時間:2021-10-13點擊次數:1054
  大腸桿菌是目前應用廣泛的蛋白表達系統,其表達外源基因產物的水平遠高于其它基因表達系統,表達的目的蛋白量甚至能超過細菌總蛋白量的80%。本實驗中,攜帶有目標蛋白基因的質粒在大腸桿菌BL21中,在37℃,IPTG誘導下,超量表達攜帶有6個連續組氨酸殘基的重組氯霉素酰基轉移酶蛋白,該蛋白可用一種通過共價偶連的次氨基三乙酸(NTA)使鎳離子(Ni2+)固相化的層析介質加以提純,實為金屬熬合親和層析(MCAC)。蛋白質的純化程度可通過聚丙烯酰胺凝膠電冰進行分析。
  蛋白表達操作步驟:
  一、氯霉素酰基轉移酶重組蛋白的誘導
  1.接種含有重組氯霉素酰基轉移酶蛋白的大腸桿菌BL.21菌株于5mL.LB液體培養基中(含100ug/ml氨芐青霉素),37C震蕩培養過夜。
  2.轉接lml過夜培養物于100mL(含100ug/l.氨芐青霉素)LB液體培養基中,37℃震蕩培養至0D600=0.6-0.8。取10u1樣品用于SDS-PAGE分析。
  3.加入IPTG至終濃度0.5mmol/1,37℃繼續培養1-3h.
  4.12,000rpm離心10min,棄上清,菌體沉淀保存于-20℃或-70℃冰箱中。
  二、氯霉素酰基轉移酶重組蛋白的分離,純化
  1.NTA層析柱的準備:在層析柱中加入1ml.NTA介質,并分別用8l去離子水,8mL.上樣緩沖液洗滌。
  2.重組蛋白的變性裂解:在冰浴中凍融菌體沉淀,加入5ml.上樣緩沖液,用吸管抽吸重懸,超聲波破裂菌體,用振蕩器等輕柔的混勻樣品60min,4℃12000rpm離心30min,將上清吸至一個干凈的容器中,并棄沉淀。取10u1上清樣品用于SDS-PAGE分析。
  3.上清樣品以10-15ml./h流速上Ni2+-NTA柱,收集流出液,取10u1樣品用于SDS-PAGE分析。
  4.洗脫雜蛋白:用Washing Buffer以10-15ml./h流速洗柱,直至0D280=0.01.分步收集洗脫液,約3-4h,取10ul洗脫開始時的樣品用于SDS-PAGE分析。
  5.洗脫目標蛋白:用Elution Buffer洗柱,收集每1l.級分,分別取10u1樣品用于SDS-PAGE分析。
熱線電話:010-56256916

關注公眾號

Copyright © 2025 安諾倫(北京)生物科技有限公司 版權所有    備案號:京ICP備16059737號-3

技術支持:化工儀器網    管理登錄    sitemap.xml

主站蜘蛛池模板: 亚洲天堂2017无码中文| 丰满的少妇愉情hd高清果冻传媒| 色婷亚洲五月| 天堂在线网www在线网| 精品一区二区三区四区五区六区| 亚洲天天影院色香欲综合| 人妻洗澡被强公日日澡电影| 亚洲精华国产精华精华液网站| 日本强伦姧人妻久久影片| av色欲无码人妻中文字幕| 成人午夜精品无码区| 人人妻人人澡人人爽精品日本| 国产亚洲精品国产福app| 亚洲妇女水蜜桃av网网站| 午夜福利09不卡片在线机视频| 日本最大色倩网站www| 精品人成视频免费国产| 欧美老熟妇乱子| 人妻影音先锋啪啪av资源| 亚洲综合精品伊人久久| 亚洲免费福利在线视频| 国产suv精品一区二区四区三区| 艳妇臀荡乳欲伦交换h在线观看| 亚洲色帝国综合婷婷久久| 亚洲无亚洲人成网站9999| 久久久一本精品99久久k精品66| 久久精品人人槡人妻人人玩| 日韩亚洲国产综合高清| 婷婷五月开心亚洲综合在线| 色偷偷色噜噜狠狠网站久久| 国产无遮挡无码很黄很污很刺激| 精品国产亚洲一区二区三区在线观看| 国产成人av男人的天堂| 欧美午夜理伦三级在线观看| 99精品久久99久久久久胖女人| 亚洲日本乱码一区二区产线一∨| 久久无码精品一区二区三区| 九九久久精品国产av片国产| 中国人妻被两个老外三p| 人妻少妇久久中文字幕456| 亚洲人成网站77777在线观看|